Produktion monoklonaler Antikörper

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Hybridom-Entwicklung

Klonen von B-Zellen

Reinigung und Charakterisierung von Antikörpern

Monoklonale Antikörper haben im Gegensatz zu polyklonalen Antikörpern, die gegen verschiedene Epitope eines Antigens wirken, eine spezielle Wirkung gegen ein einzelnes Epitop eines Antigens. Die speziellen Merkmale monoklonaler Antikörper ermöglichen es Forschern, die Wirkung auf dieses Epitop zu erforschen, selbst wenn die Veränderungen des Epitops nur geringfügig sind. Gelegentlich verändert sich lediglich eine einzelne Aminosäure. Ein bedeutender Vorteil monoklonaler Antikörper besteht darin, dass diese Antikörper mit denselben Merkmalen und der identischen Struktur in einer unbegrenzten Menge zur Verfügung gestellt werden können, da sie sich entweder aus einer Hybridom- oder einer rekombinanten Zelllinie bilden.

Labcorp nutzt zwei unterschiedliche Technologien, um monoklonale Antikörper zu entwickeln: die Hybridom-Entwicklung und das Klonen von B-Zellen. Für die Hybridom-Entwicklung werden Nagetiere mit dem Antigen immunisiert und, falls eine ausreichende Immunreaktion festgestellt wird, werden die Antikörper bildenden Zellen mit einer Myelomzelllinie verbunden und gescreent. Alternativ werden bei dem Klonen von B-Zellen die Milzzellen der immunisierten Tiere gescreent und die schweren und leichten Kettengene werden geklont und von den ausgewählten B-Zellen exprimiert. Beide Technologien bieten die Möglichkeit, eine nahezu unbegrenzte Menge an Antikörpern mit identischen Merkmalen zu entwickeln.

Hybridom-Entwicklung

  • Wirtsarten unter Nagetieren
  • Zur Verbindung werden Milzzellen und/oder Lymphknoten genutzt
  • Unterschiedliche Verbindungsverfahren, wie die Polyethylenglykol-Verbindung (PEG) oder die Elektrofusion

Klonen von B-Zellen

  • Nahezu alle Wirtsarten
  • Antigenspezifische Isolation von B-Zellen mittels FACS
  • Klonen schwerer und leichter Kettengene
  • Expression in Vektoren von Säugetieren und Entwicklung stabiler Zellen

Reinigung und Charakterisierung von Antikörpern

  • Scale-up:
    • Aszites oder In-vitro-Methoden
    • Mykoplasmentests, Isotypisierung
  • Cell Banking/Lagerung von Hybridom-Zelllinien
  • Transiente Transfektion von Vektoren von Säugetieren

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